家族を殺され、その復讐のためにアサシンとして戦うことを選んだエツィオは、「マスターアサシン」と呼ばれるまでに成長していた。
その頃ローマは、教皇となったロドリゴ・ボルジアと腐敗した支配層によって、堕落の一途をたどっていた。
ボルジア家の支配がイタリア全土まで及ぶことに危機を感じたエツィオは、ローマに潜入し、そこでアサシン教団を組織して戦うことを決意する。
しかし、エツィオたちの前には、ロドリゴの息子・チェーザレが立ちふさがる。
果たして、エツィオたちは彼らを打ち倒し、イタリア全土に新たなルネッサンス（歴史的文化革命）をもたらすことができるのだろうか。
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